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活細胞成像方法簡介

時間: 2022-09-23瀏覽次數(shù):2264
   活細胞成像技術(shù)徹底革新了生物學(xué)家研究細胞、蛋白質(zhì)以及眾多分子之間相互作用和生理過程的方式。這項技術(shù)使得科學(xué)家們可以實時或者在一段時間內(nèi)觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和細胞生理過程。了解這些細胞結(jié)構(gòu)和動態(tài)過程對于解釋許多細胞生物學(xué)問題是至關(guān)重要的。與固定細胞的成像研究中提供的“快照”相比,對于動態(tài)變化的觀察使得人們對細胞的運作過程的認識更加深入。此外,由于活細胞成像更不容易引入實驗偽影,它通常能提供比固定細胞成像更加真實可靠的信息。這篇綜述將回顧活細胞成像的系統(tǒng)構(gòu)成、使用的探針、常見的方法和應(yīng)用。

 

活細胞成像(live cell imaging)統(tǒng)稱為捕捉活的、活動狀態(tài)的細胞圖像的技術(shù),這些細胞圖像可以是單個靜態(tài)圖像,也可以是延時系列圖像。相應(yīng)地,活細胞成像的應(yīng)用可以分為兩大類:

  1. 1、細胞在自然狀態(tài)下的圖象記錄

  2. 2、實時觀察和記錄細胞、組織或整個生物體的動態(tài)過程

 

活細胞成像在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用一直在上升,這在很大程度上是由于熒光標記技術(shù)、電子技術(shù)、數(shù)據(jù)處理和光學(xué)方面的技術(shù)進步。

20世紀60年代早期綠色熒光蛋白的發(fā)現(xiàn)和20世紀90年代以來其許多衍生物的廣泛使用標志著顯微鏡新時代的開始。熒光蛋白的使用,

無論是單獨使用還是在產(chǎn)生融合型熒光蛋白后使用,都使細胞和細胞成分的監(jiān)測成為可能,可用的蛋白質(zhì)和酶靶的數(shù)量不斷增加。

 

正如前面所提到的,活細胞成像的第二個也是更明顯的優(yōu)勢是,它能夠記錄細胞、組織或整個生物體發(fā)生的動態(tài)過程。從細胞分裂到細胞在培養(yǎng)物和有機切片中的遷移,

到細胞器的運動和轉(zhuǎn)換,到鈣成像,大量的過程可以被實時可視化和記錄。熒光標記標記特定的細胞器,其光譜行為的變化與細胞和細胞器內(nèi)的化學(xué)變化相對應(yīng)的標記為我們提供了前所未有的細胞工作的洞察力。

 

       使用活細胞成像方法可以研究許多生物學(xué)問題,一些特定的成像系統(tǒng)也可以用來觀測活體動物中的分子。如下表常見的應(yīng)用及其對應(yīng)的顯微成像方法。

實驗需求方法名稱縮寫
觀測分子在細胞內(nèi),以及細胞之間(通過縫隙連接)的運動漂白后熒光恢復(fù)FRAP
離子濃度(鈣、鎂)的時間或空間變化離子成像
細胞內(nèi)鈣離子濃度的定量比例法離子成像
生物傳感熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET
觀測發(fā)生在細胞膜上或者附近的事件,或者對薄切片成像全內(nèi)反射顯微成像TIRF
對細胞進行長期成像時域熒光壽命顯微成像TD-FLIM
觀測某個分子隨著時間的擴散情況單分子示蹤-熒光相關(guān)譜SMT-FSC
單分子的精確分辨光激活定位顯微鏡PALM





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